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daniela240885.
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Ciao a tutti, avrei bisogno di una spiegazione tecnica su qualcosa che non mi è chiarissimo che devrò commentare sulla mia tesi di laurea. avrei bisogno di una spiegazione del modello sperimentale riportato qui sotto o perlomeno il meccanismo di come funziona.
Coltura e differenziazione delle hESC
Le cellule HES3 (MIXL1 gfp/wt) vengono coltivate di routine su cellule nutrici di fibroblasti embrioniche irradiate del topo in F12/DMEM (LIFE TECHNOLOGIES) integrate con 20% del siero Knock Out ( LIFE THECNOLOGIES), 100 micromoli MEM NEAA (life technologies), 110 micromoli di 2 mercaptoenolo (life technologies) , 1 micomole di penicillina /streptomicina (life technologies) , 1 micromole di glutamax (life technologies) e 10 nanogrammi su millilitro bFGF (R&R SYSTEM). Il giorno prima di iniziare la differernziazione le cellule vennero piastrate a 12000- 15000 cellule su cm quadro su una piastra a 96 pozzetti rivestita di Matrigel. Dopo la coltura per una notte le cellule vennero esposte a 30 nanogrammi per millilitro di BMP4 (R & D SYSTEM) e 10 nanogrammi per millilitro di attivina A o 8 micromoli di CHIR99021 in un media libero da siero APEL precedentemente stabilito per 2-3 gg, poi 200 nanogrammi per millilitro di FGF9 e 1 microgrammo per millilitro di eparina in APEL media per 4 gg per indurre le cellule IM. Successivamente le cellule vennero esposte a 200 nanogrammi per millillitro di FGF9 , 50 nanogrammi per milliltro di BMP7 , 0,1 micromoli di RA E 1 MICROGRAMMO PER MILLILITRO DI EPARINA PER 4 - 11 gg nela caso di induzione da BMP4/attivina A. Nel caso di induzione da CHIR99021, le cellule vennero esposte a 200 nanogrammi per milliltro di FGF9 e un microgrammo per millilitro di eparina per 6 gg poi coltivate in un media basale APEL PER ULTERIORI 6 gg. i media furono cambiati ogni 2 gg.
Mi interesserebbe sapere bene come funziona questo metodo di coltura e differenziamento delle cellule staminali embrionali non tanto capire proprio il procedimento relativo alle quantita di prodotti utilizzati.
Spero che qualcuno di voi mi possa aiutare.
Grazie mile.
Coltura e differenziamento delle hESC |