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Lunaredhell.
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Buongiorno a tutti,
avrei un quesito da proporvi, su cui ho ragionato con un amico, ma non sono del tutto sicura della risposta:
In una miscela sono presenti tre proteine, che devono essere ottenute ciascuna in forma pura, con le seguenti caratteristiche:
- proteina 1 acida (pI = 5.6) con peso molecolare di 15000 Dalton
- proteina 2 acida (pI = 4.8) con peso molecolare di 60000 Dalton
- proteina 3 basica (pI = 10.0) con peso molecolare di 13000 Dalton
Indicare quali separazioni cromatografiche si potrebbero allestire per separarle, descrivendo i principi di funzionamento e i risultati attesi.
Dunque la prima che mi viene in mente è una cromatografia ascambio ionico.. se abbiamo una resina con delle cariche negative e positive, le proteine si legheranno ad essa perchè anche le proteine sono cariche, ma se per eluirle cambiamo il PH in modo da raggiungere i tre diversi punti isoelettrici le proteine al loro punto isoelettrico non avranno cariche, si staccheranno dalla resina e verranno separate. Quindi se partiamo da un PH acido e man man lo alcalinizziamo otteremmo prima la Proteina con pI 4.8, poi quella con pI 5.6 e per ultima l'altra.
E' fattibile secondo voi???. -
Comy.
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teoricamente sì
praticamente, la risposta più bella sarebbe che usi 2 tipi di separazione: essendo il pI di 1 e 2 vicino, le potresti dividere bene in base alla dimensione...
viceversa sulla base della dimensione 1 e 3 sono vicine
quindi scambio ionico + gel filtrazione e avrai un risultato ottimale ^^. -
Lunaredhell.
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Uh verissimo!!! Allora ci aggiungo la gel filtrazione et voilà! 
Grazie mille!!!.
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