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GiorgiaB86.
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Ciao, mi sono appena iscritta a biotecnologie e avrei bisogno di qualche dritta per questi quesiti:
1. Voglio produrre in grandi quantità un polipeptide idrofilico, del peso di 25 kDa, che sarà utilizzato come farmaco per la cura di una malattia. Dispongo del cDNA di questo polipeptide.
Descrivere per punti la strategia che si intende adottare per produrre e purificare efficacemente il polipeptide tenendo conto dei possibili problemi a cui si può andare incontro e delle eventuali soluzioni;
2. Mediante l'uso di una sonda omologa ho operato lo screening di una libreria di cDNA alla ricerda del clone codificante una proteina di 60KDa espressa nel fegato di topo che voglio produrre in forma ricombinante. Ho purificato un clone che, opportunamente digerito con enzimi di restrizione, è risultato lungo circa 2100 bp.
Ritiene che questo frammento costituisca il cDNA della proteina che sto cercando? In caso positivo o negativo come pensa di continuare l'analisi?
3. La fibrosi cistica è dovuta alla mutazione del gene (completamente sequenziato) CFTR. La mutazione R1162ter provoca il cambiamento della tripletta CGA (Arginina) nella tripletta UGA (tripletta di stop); questa mutazione causa anche la comparsa di un sito di restrizione per l'enzima DdeI.
Quale procedura può essere usata nella diagnosi prenatale? Su quale principio si basa e come si interpreta il risultato?
4. Devo produrre in grandi quantità una proteina virale glicosilata che si vorrebbe usare per l'immunizzazione dei polli. Ho a disposizione il cDNA della proteina e un anticorpo monoclonale in grado di riconoscerla. Quale sistema di espressione devo usare e perchè? Che strategia adotto per purificare la proteina?
5. Conosco la sequenza del primo esone di un gene, espresso nel rene di topo, del quale vuole clonare il cDNA. Con quello che ho a disposizione riesco a clonare il cDNA? Che strategia adotto per ottenere il cDNA?
Grazie mille!.
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