-
Valentina84M0.
User deleted
Ciao,
vi prego aiutatemi a risolvere questa confusione che ho riguardo al calcolo di Vmax e Km usando l'equazione di Michaelis e Menten.
Ho questi dati sperimentali e devo calcolare Vmax e Km in assenza e presenza di inibitore:
..[S](M)....V0senza-inib...V0con-inibit.
0,3X10^-5........10,4.............4,1
0,5X10^-5........14.5.............6,4
1,0X10^-5........22.5.............11,3
3,3X10^-5........33,8.............22,6
9,3X10^-5........40,5.............33,8
unità di misura V0= micromoli/min
unità di misura [S]=M
Adesso dovrei considerare i reciproci dei suddetti valori e metterli sugli assi cartesiani per ottenere una retta che mi segna Vmax e Km(metodo dei doppi reciproci).
Ma la mia domanda è:
COME FACCIO A METTERE QUESTI NUMERI CON QUESTI VALORI?CI VORREBBE UN FOGLIO GRANDE QUANTO UNA PIAZZA.
Quindi ho pensato, come alcuni fanno, di risolvere il problema usando un semplice sistema di due equazioni così da trovarmi Km e Vmax.
Posso scegliere due punti a caso dato che, se non sbaglio, il risultato dovrebbe essere lo stesso. Quindi, dai dati sperimentali sopra riportati scelgo:
[S]=3,3X10^-5; V0=33,8
[S]=9,3X10^-5; V0=40,5
e imposto il mio sistema calcolando Vmax e Km senza inibitore:
l'eq.di Michaelis e Menten è:
V0=(Vmax[S])/(Km+[S]
quindi il mio sistema sarà:
33,8=(Vmax0,000033)/Km + 0,000033
40,5=(Vmax0,000093)/(Km + 0,000093)
Risolvendo il sistema trovo che Vmax e Km sono:
Km= 0,00001
Vmax= 45,4
Io pensavo di potermi fidare di questi valori trovati con questo metodo e per curiosità ho provato a vedere se prendendo altri due punti di riferimento e impostando il sistema mi dava gli stessi valori.
MA NON E' COSI'. Alcune volte Vmax è più e altre meno di 45,4 e lo stesso vale per Km. I valori sono simili ma non precisi e non corrispondono. Se poi devo calcolare Vmax e Km con la presenza di un inibitore è un casino capire di che tipo di inibizione si tratta.
Esempio ho calcolato VmaX E Km usando questi valori in presenza di inibitore:
[S]=3,3X10^-5; V0=22,6
[S]=9,3X10^-5; V0=33,8
e Vmax e Km mi sono venuti:
Vmax= 46,47
Km= 0,00003
IO POSSO CAPIRE CHE VMAX DIMINUISCA, MA NON CHE ADDIRITTURA AUMENTI IN PRESENZA DI INIBITORE.
Perfavore aiutooo, che cosa sbaglio?Eppure le equazioni sono giuste perchè ho fatto la verifica.
1)E' GIUSTO IL METODO DI IMPOSTARE UN SISTEMA DI 2 EQUAZIONI PRENDENDO DUE COPPIE DI VALORI [S]e V0 A CASO PER TROVARE KM E VMAX?
2)SE NON POSSO USARE IL METODO DEI DOPPI RECIPROCI A CAUSA DI NUMERI TROPPO GRANDI O TROPPO PICCOLI, COME NEL MIO CASO, COME POSSO FARE PER TROVARE QUESTA BENEDETTA KM E VMAX?
VI PREGOOOOOOOO AIUTATEMIII
. -
M111.
User deleted
Non puoi semplicemente usare due scale diverse tra ordinate e ascisse?
Forse non ho ben compreso il tuo problema.... -
Valentina84M0.
User deleted
Dici di convertire le moli in micromoli per esempio?
Avendo questi dati:
..[S](M)....V0senza-inibitore
0,3X10^-5........10,4
0,5X10^-5........14.5
1,0X10^-5........22.5
3,3X10^-5........33,8
9,3X10^-5........40,5
prendiamo ad esempio la prima coppia di punti:
[S]= 0,3X10^-5 M; V0=10,4 micromoli/min
se converto 0,3X10^-5 M in micromoli viene:
0,3X10^-5 M= 3 micromoli
V0 la lascio così per com'è, in micromoli/s
Nel grafico uso quindi le coordinate:
1/[S]= 0,3 e 1/V0= 0,09 che arrotondo a 0,1
quindi punto A(0,3; 0,1)
Dici che risulta lo stesso?. -
M111.
User deleted
L'hai fatto il grafico?
Da un punto di vista rappresentativo no nc'è niente di male eventualmente ad usare due scale diverse, basta spiegare cosìè successo
Siccome sono esercizi, non usare Excell...fai tutto da sola....non stai lavorando, stai studiando
Edited by M111 - 17/1/2009, 15:42. -
M111.
User deleted
Ho poi notato che tra tutti i vari forum in cui hai copia/incollato la richiesta, in quello dei chimici hai ricevuto lo stesso consiglio che ti ho dato io....
...questo mi fa pensare che io non sia poi così stupido
Ovviamente mi permetto di metter questa battuta perchè tu hai risolto il tuo problema.....mi fa bene scherzare, soprattutto in certi momenti............... -
Francesca Sica.
User deleted
Anche io ho avuto problemi con un esercizio simile. Valentina alla fine lo hai risolto? .
Biochimica: Km e Vmax-Vi prego sono persa :( |