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**Stefy83**.
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Qualcuno di voi ne sa qualcosa? Nei lucidi che ci ha dato il mio prof ho trovato questo, ma senza spiegazione non sono riuscita a capire molto. Dallo schema mi sembra simile al clonaggio posizionale, ma non ne sono sicura...HELP 
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paolabio.
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Mi spiace Stefy non poterti aiutare non so molto di queste cose.
L'esperta in materia è Foster, confidiamo in lei!!!!
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**Stefy83**.
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eh lo so Paola, confido in Foster! 
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ilarip.
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Ciaoooooo Stefy
dopo aver chiesto un po' in giro tra i miei amici qualcosa sono riuscita a recuperrare
Per il clonaggio di un break point parti all'inizio utilizzando diverse sonde per fare una FISH su cromosomi metafasici e osservi quale sonda è in grado di ibridare su 3 punti: sul cromosoma parentale normale e sui due derivati. A questo punto la sonda per fish(che sarà almeno di 10 Kb) la vai a clonare in vettori di capienza più piccola in modo da ridurre la dimensione della sonda, e verifichi sempre che queste sonde più piccole ibridino in tre punti. Alla fine dovresti riuscire a clonare il solo frammento di Dna (magari un gene) a livello del quale è avvenuto il break point.
Questo è tutto quello che sono riuscita a farmi dire......del ragazzo che mi ha dato le info mi fido è bravo quindi spero che sia corretto
ciaooooooooo. -
**Stefy83**.
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grazie mille ilaria!
mi sa che questo è un altro metodo (che non conoscevo) rispetto a quello che ho nel lucido...bhè, meglio di niente! Nel caso in cui qualcuno conoscesse anche il metodo del mio lucido ben venga! ;D. -
ilarip.
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di nulla figurati stefy
mi dispiace d nn averti potuto aiutare ........
ciaoooooooo. -
Foster83.
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Io devo controllare i miei appunti.. io so qualcosa per costruire mappe genetiche. . -
ilarip.
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Ciaooo Stefy spero tu ne abbia ancora bisogno
ho trovato questo:
il clonaggio dei breakpoint si fa mediante l'uso di sonde BAC o PAC per anadare a identificare il più accuratamente possibile il punto di rottura del cromosoma e quindi l'origine dell'eventuale cromosoma derivativo. si attuano diversi esperimenti di FISH con diverse sonde, partendo da sonde che mappano in zone distanti dal punto di rottura per avvicinarsi sempre di più a esso.Le sonde vengono scelte au opporuni database e sotto la guida di quanto evidenziato dal bandeggio Q (è il primo passaggio che si fa, ha una bassa risoluzione ma dà un'idea della banda in cui si trova il breakpoint). i segnali non mi risulta che debbano essere tre devi perchè i avrai un chr normale e il derivativo quindi ti aspetti che se la sonda ibrida una regione mantenuta sul derivativo avrai due segnali uno sul chr normale e uno sul derivativo, altrimenti se qquella regione viene persa si avrà solo il segnale sul chr normale e non sul derivativo. i risultati iniziano a essere sufficientemente descrittivi quando la zona di breakpoint è inferiore almeno alle 20.000 bp, ovviamente minore è l'ntervallo migliore sarà la caratterizzazione del breakpoint.
spero di essere stata abbastanza chiara!
ciaooooooo
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clonaggio di un break point |